Isolation and genetic characterization of Toxoplasma gondii from free-ranging and captive birds and mammals in Pernambuco state, Brazil / Isolamento e caracterização genética de Toxoplasma gondii de aves e mamíferos de vida livre e cativeiro em Pernambuco

Abstract Recent genetic population studies on Toxoplasma gondii in Brazil have shown large genetic variability. The objective of the present study was to isolate and genotypically characterize T. gondii from free-ranging and captive wild mammals and birds in Pernambuco state, Brazil. Fragments of heart, brain, skeletal muscle and diaphragm tissue from 71 birds and 34 mammals, which were either free-ranging or captive, were collected. Samples from 32 of these animals were subjected to bioassays in mice. Samples from the remaining 73 animals underwent biomolecular diagnosis, using PCR technique, targeting a repetitive DNA fragment of 529 bp in T. gondii. A non-virulent isolate (TgButstBrPE1) was obtained from a free-ranging striated heron (Butorides striata) and, based on primary samples, seven animals were found to be positive. The primary samples and the isolate obtained were subjected to PCR-RFLP using the markers SAG1, 5'3'SAG2, alt.SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico and CS3. ToxoDB-RFLP genotype #13 from the striated heron isolate and Type BrIII genotype from a captive otter ( Lontra longicaudis) (PS-TgLonloBrPE1) were obtained. The present study describes the first isolation and genotypic characterization of T. gondii in free-ranging striated heron, and the first genotypic characterization of T. gondii in a captive otter.

Resumo Recentes estudos genéticos nas populações deste parasita no Brasil têm mostrado grande variabilidade genética. O objetivo do presente estudo foi isolar e caracterizar genotipicamente T. gondii de aves e mamíferos de vida livre e de cativeiro no estado de Pernambuco, Brazil. Fragmentos de tecido do coração, cérebro, músculo esquelético e diafragma de 71 aves e 34 mamíferos de vida livre ou cativeiro foram colhidos. Amostras de 32 destes animais foram submetidas a bioensaios em camundongos. As amostras dos 73 animais restantes foram submetidas a diagnóstico biomolecular usando a técnica de PCR, tendo como alvo o fragmento repetitivo de 529 pb do DNA de T. gondii. Dentre os 32 bioensaios conduzidos, obteve-se um isolado não-virulento (TgButstBrPE1) de um socozinho (Butorides striata ) de vida livre, e dentre as amostras primárias, sete animais foram positivos. As amostras primárias e o isolado foram submetidos a PCR-RFLP usando os marcadores SAG1, 5'3'SAG2, alt.SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico e CS3. Foram obtidos o genótipo ToxoDB-RFLP #13 do isolado do socozinho e o genótipo Type BrIII de uma lontra (Lontra longicaudis) de cativeiro (PS-TgLonloBrPE1). O presente estudo descreve o primeiro isolamento e caracterização genotípica de T. gondii em socozinho de vida livre, e a primeira caracterização genotípica de T. gondii em lontra em cativeiro.

Fatal toxoplasmosis in an immunosuppressed domestic cat from Brazil caused by Toxoplasma gondii clonal type I / Toxoplasmose fatal em um gato doméstico imunossuprimido do Brasil causada por Toxoplama gondii clonal tipo I

Abstract The objective of the study was to report on a fatal case of feline toxoplasmosis with coinfection with the feline leukemia virus (FeLV). A domestic cat (Felis silvestris catus) presented intense dyspnea and died three days later. In the necropsy, the lungs were firm, without collapse and with many white areas; moderate lymphadenomegaly and splenomegaly were also observed. The histopathological examination showed severe necrotic interstitial bronchopneumonia and mild necrotic hepatitis, associated with intralesional cysts and tachyzoites of Toxoplasma gondii that were positive by anti-T. gondii immunohistochemical (IHC) evaluation. The bone marrow showed chronic myeloid leukemia and the neoplastic cells were positive by anti-FeLV IHC evaluation. DNA extracted from lungs was positive for T. gondii by PCR targeting REP-529. T. gondii was characterized by PCR-RFLP and by the microsatellites technique. ToxoDB-PCR-RFLP #10, i.e. the archetypal type I, was identified. Microsatellite analysis showed that the strain was a variant of type I with two atypical alleles. This was the first time that a T. gondii clonal type I genotype was correlated with a case of acute toxoplasmosis in a host in Brazil.

Resumo O objetivo deste estudo foi relatar um caso de toxoplasmose felina fatal com coinfecção com o vírus da leucemia felina (FeLV). Um gato doméstico (Felis silvestris catus) apresentou intensa dispneia e morreu três dias depois. Na necropsia, observaram-se pulmões firmes, não colabados e com múltiplas áreas brancas, além de linfoadenomegalia e esplenomegalia moderadas. No exame histopatológico, evidenciaram-se broncopneumonia intersticial necrótica acentuada e hepatite necrótica discreta associada a cistos e taquizoítas de T. gondii intralesionais positivos na imuno-histoquímica (IHC) anti-T. gondii. Evidenciou-se ainda, na medula óssea, leucemia mieloide crônica com IHC anti-FeLV positiva nas células neoplásicas. O DNA extraído dos pulmões foi positivo para T. gondii por meio da PCR-REP-529. T. gondii foi caracterizado por PCR-RFLP e pela técnica de microssatélites. Foi identificado o genótipo ToxoDB-PCR-RFLP #10, i.e., o arquétipo tipo I. A análise por microssatélites mostrou que a cepa era uma variante do tipo I, com dois alelos atípicos. Esta é a primeira vez que T. gondii clonal tipo I foi relacionado com um caso agudo de toxoplasmosis em um hospedeiro no Brasil.

Avaliação da eficácia de produtos isoterápicos no controle de Rhipicephalus (Boophilus) microplus / Evaluation of the efficacy of products isoterapicos in control of Rhipicephalus (Boophilus) microplus

O Rhipicephalus (Boophilus) microplus é responsável por consideráveis perdas na pecuária brasileira. O controle desse parasita tem sido feito, principalmente, com o uso de carrapaticidas, sendo os isoterápicos uma alternativa para seu combate. Objetivou-se neste trabalho analisar a eficiência da utilização da isopatia como ferramenta de controle alternativo do carrapato-do-boi. Foram utilizadas 18 fêmeas bovinas de raça europeia, mantidas em sistema de pecuária extensiva, no município de Canguçu, Rio Grande do Sul. Os animais foram divididos em grupo controle (Lote A) e grupo tratado com isoterápico (Lote B). O sal mineral foi utilizado como veículo para a administração da isopatia, sendo que o Lote A recebeu sal mineral com placebo (açúcar) e o Lote B sal mineral com isopatia. Os animais foram infestados artificialmente com 10 mil larvas deR. (B.) microplus , e no 20º, 21º e 22º dias pós-infestação, foram realizadas contagem e coleta de fêmeas ingurgitadas. As teleóginas de cada lote foram divididas ao acaso em nove grupos de dez indivíduos para análise dos parâmetros biológicos e posterior cálculo do Índice Nutricional e Índice de Eficácia Reprodutiva. Para comparação da média de teleóginas de cada grupo, foi empregada análise de variância e Teste LSD. Os bovinos tratados com isopatia apresentaram uma redução de 53,4% do número médio de teleóginas, quando comparados com o grupo não tratado (p = 0,001). Quanto aos padrões biológicos, não houve diferença estatística. Conclui-se que o uso de isopatia foi capaz de reduzir a infestação de R.(B.) microplus , mostrando-se uma alternativa promissora para o controle deste ixodídeo.(AU)

The Rhipicephalus (Boophilus)microplus is responsible for considerable losses in Brazilian cattle. The control of such parasites has been done mainly with the use of acaricides, and the isopathy is an alternative. The objective of this work is to analyze the efficiency of the use of isopathy as an alternative tool to control the cattle tick. We used 18 cows of the European race, kept in extensive livestock system in the municipality of Canguçu, Rio Grande do Sul, Brazil. The animals were divided into control group (Lot A) and group treated with isopathy (Lot B). Mineral salt was used as a vehicle for the administration of isopathy, Lot A received mineral salt with placebo (sugar) and Lot B received mineral salt with isopathy. The animals were artificially infested with 10 thousand larvae of R. (B.) microplus , and in the days 20, 21 and 22 post-infestation engorged females were counted and collected. The ticks from each batch were randomly divided into nine groups of ten subjects each for analysis of biological parameters and subsequent calculation of the Nutritional Index and the Effectiveness Reproductive Index. For comparison of average engorged females from each group were employed ANOVA and LSD Test. The animals treated with isopathy showed a 53.4% reduction in the average number of ticks when compared with the untreated group (p = 0.001). As for biological standards, there was no statistical difference. It is concluded that the use of isopathy was able to reduce infestation of R. (B.) microplus , showing up as a promising alternative to control this ticks.(AU)